本試劑盒僅供研究使用 檢測范圍：1 μg/ml - 40 μg/ml zui低檢測限：1 μg/ml 特異性：本試劑盒可同時檢測天然或重組的大鼠TG，且與其他相關蛋白無交叉反應。 有效期：6個月 預期應用：ELISA法定量測定大鼠血清或其它相關生物液體中TG含量。 說明 1．試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時）；2-8℃（頻繁使用時）。 2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 3．中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。 4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會對實驗結果造成任何影響。 實驗原理 用純化的羊抗兔包被微孔板，制成固相載體，然后向微孔中依次加入標本或標準品、HRP標記的TG以及抗TG抗體，經(jīng)過*洗滌后用底物溶液顯色。底物在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的TG呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 2. 標準品（Standard）：5×0.5 ml/瓶。 | 標準品 | S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | | 濃度 （μg/ml） | 0.8 | 2.4 | 8 | 20 | 40 | 3. 酶結合物（HRP-Conjugate）：1×6 ml/瓶。 4. 抗體（Antibody）：1×6 ml/瓶 5. 底物溶液A（Substrate A）：1×7ml/瓶。 6. 底物溶液B（Substrate B）：1×7ml/瓶。 7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。 8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的試劑和器材 1. 標準規(guī)格酶標儀 2. 高速離心機 3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱 4. 干凈的試管和Eppendof管 5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器 6. 蒸餾水，容量瓶等 標本的采集及保存 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。 注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。 標本的稀釋原則： 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結果才是準確的。稀釋的過程中，應做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應再乘以“N”。 操作步驟 實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用先進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1. 加樣：設一個空白對照孔，不加任何溶液。余孔分別加標準品或待測樣品50μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁。 2. 每孔加酶結合物 50μl和抗體50μl，空白孔不加。充分混勻，37℃溫育2小時。 3. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，200μl/每孔，甩干。 4. 依序每孔加底物溶液A和B各50μl，37℃避光顯色15分鐘內(nèi)。 5. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。 6. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。 注： 1. 用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。 4. 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。 洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩，避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。 5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。 6. 底物請避光保存。 7. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 |
