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主營(yíng):ELISA試劑盒,化學(xué)試劑,生物醫(yī)學(xué)試劑,生命科學(xué)科研產(chǎn)品.
 
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒[ELISA Kit]
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ELISA基本原理
點(diǎn)擊次數(shù):992 更新時(shí)間:2010-07-09

        ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡(jiǎn)稱。近二十幾年來,免疫學(xué)分析方法發(fā)展很快,特別是在使用標(biāo)記了的抗原和抗體的分析技術(shù)以后,使原來許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。繼50年代的免疫熒光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后,1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)用于IgG定量測(cè)定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法,建立了用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù),是一種用酶標(biāo)記抗原或抗體的方法。由于酶的生物催化作用,一個(gè)酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生了放大作用,使得原來極其微乎其微的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識(shí)別出來。
    ELISA試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。將抗原、抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的催化作用原理有機(jī)地結(jié)合起來,可敏感地檢測(cè)體液中微量的特異性抗體或抗原。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。 
    ELISA基本原理) f1 l6 A& _( B! i6 Z2 E
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ),將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。7 b, u8 G: Q( f. e# s
ELISA基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記,基本原理有三條:1 q" g9 ?* z: j  a4 ^" x# a
(1) 抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
 (2) 抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
 (3) 酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。2 t1 d1 s0 I4 H- t* A
由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,每加入一種試劑孵育后,可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。. L2 x4 _- g6 f0 k
在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

 
 
   
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