兩對半使用ELISA方法，其中HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體夾心法檢測，而HBcAb、HBeAb使用競爭抑制法檢測。 而競爭抑制法的原理：酶標抗體與樣本抗體在同樣的體系中，與固相抗原競爭結(jié)合是等比關(guān)系。原論上講，應該先將樣本與酶標抗體先行混勻，然后加入反應也進行。但實際工作中并非如此，都是分開加入反應孔。這樣會造成先加入的先結(jié)合，與后加入者并不是公平的關(guān)系，因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長，且溫度高的情況下，對結(jié)果有很大的影響。
第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院對此造成的影響進行了研究。將陰性標本94份并用生理鹽水進行1：30稀釋，在加入標本后按下表時間放置后再加入酶標抗體，然后檢測結(jié)果如下：
| 放置時間（min） | 陰性標本數(shù) | 臨界值－標本A450nm值 | 假陽性率（%） | | <0.3 | 0.3~0.7 | >0.7 | | 0 | 75 | 10 | 3 | 6 | 0 | | 2 | 68 | 13 | 7 | 6 | 7.4 | | 5 | 65 | 15 | 8 | 6 | 10.6 | | 10 | 56 | 16 | 12 | 10 | 20.2 | | 20 | 38 | 18 | 17 | 21 | 39.3 | | 30 | 21 | 12 | 18 | 43 | 57.4 |
從上表可以看出，如果同時加入標本與酶標抗體，沒出現(xiàn)假陽性現(xiàn)象。2分鐘后再加入酶標抗體，由于標本比酶標抗體先結(jié)合了兩分鐘，因此出現(xiàn)了7.4%的假陽性。30分鐘后再加，假陽性高達57.4%。因此建議競爭抑制法的項目，加十個樣本后立即加酶標抗體，這樣對檢測結(jié)果沒有影響。
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