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酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒[ELISA Kit]
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大鼠單核細胞趨化蛋白-1( MCP-1)酶聯(lián)免疫(ELISA)試劑盒使用說明書
點擊次數(shù):962 更新時間:2010-07-11

本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:大鼠單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、相關(guān)組織液中單核細胞趨化蛋白-1 的含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)水平。用純化
的大鼠單核細胞趨化蛋白-1 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中加入單
核細胞趨化蛋白-1(MCP-1),再與HRP 標記的羊抗鼠抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)
合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)呈正相關(guān)。
用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠單核細胞趨
化蛋白-1(MCP-1)的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶
2 酶標試劑3ml×1 瓶8 標準品(900ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×4 條9 標準品稀釋液1.0ml×1 瓶
4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本處理及要求
1.血清、血漿標本可直接測定;
2.尿液、腦脊液、腹腔液:2000-3000 轉(zhuǎn)/分離心10 分鐘后,取上清液待測。
3. 不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
4.采集后盡早進行實驗,若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反
復(fù)凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設(shè)標準品孔10 孔,在*、第二孔中分別
加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;再各取100μl 分
別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后,在第
三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉;再各取50μl 分別加到第五、第六孔中;再在第五、
第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加
到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,
混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為 600
ng/L,400 ng/L ,200 ng/L,100 ng/L,50 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣
2
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD 值為縱坐標(普通坐標),在坐標紙上繪出
標準曲線,根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的
濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品
濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標準品孔*孔OD 值的1.5 倍),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測
定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
檢測范圍:
30 ng/L -700 ng/L
規(guī)格:
48 人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月

 
 
   
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