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本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱：
通用名：大鼠單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、相關(guān)組織液中單核細胞趨化蛋白-1 的含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）水平。用純化
的大鼠單核細胞趨化蛋白-1 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入單
核細胞趨化蛋白-1（MCP-1），再與HRP 標記的羊抗鼠抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)
合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的單核細胞趨化蛋白-1（MCP-1）呈正相關(guān)。
用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠單核細胞趨
化蛋白-1（MCP-1）的含量。
試劑盒組成
1 20 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶
2 酶標試劑3ml×1 瓶8 標準品（900ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板12 孔×4 條9 標準品稀釋液1.0ml×1 瓶
4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張
6 顯色劑B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 個
標本處理及要求
1．血清、血漿標本可直接測定；
2．尿液、腦脊液、腹腔液：2000-3000 轉(zhuǎn)/分離心10 分鐘后，取上清液待測。
3． 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反
復(fù)凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設(shè)標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別
加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl 分
別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第
三孔和第四孔中先各取50μl 棄掉；再各取50μl 分別加到第五、第六孔中；再在第五、
第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl 分別加
到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl 加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻后從第九第十孔中各取50μl 棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為 600
ng/L，400 ng/L ，200 ng/L，100 ng/L，50 ng/L）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣
2
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣
品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標（對數(shù)坐標），OD 值為縱坐標（普通坐標），在坐標紙上繪出
標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的
濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品
濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔OD 值的1.5 倍），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測
定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 嚴格按說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6．本試劑不同批號組分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．底物請避光保存。
檢測范圍：
30 ng/L -700 ng/L
規(guī)格：
48 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月