本試劑盒僅供研究使用
檢測范圍:8μIU /ml -140μIU /ml特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的INS,且與其他相關(guān)蛋白基本無交叉反應。有效期:6個月(2-8℃避光保存)預期應用:ELISA法定量測定人血清,血漿及其它相關(guān)生物液體中INS含量。說明 1. 濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。 2. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。實驗原理采用酶聯(lián)免疫法夾心法檢測胰島素含量。首先用一株單抗體包被微孔板,制備成固相抗體,然后加入待測標本及辣根過氧化物酶標記的另一株單抗,使之形成包被抗體-胰島素-酶標記抗體的復合物。經(jīng)顯色后在酶標儀測定吸光值(OD值),通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線,反算出待測標本中胰島素含量。試劑盒組成及試劑配制 1. 酶聯(lián)板(Assay plate ): 一塊(96孔)。 2. 標準品(Standard): 5瓶(凍干品)。標準品為凍干品,使用前分別用0.5ml蒸餾水溶解,溶解后濃度分別為:Standard 1 Standard 2 Standard 3 Standard 4 Standard 58μIU/ml 16μIU/ml 32μIU/ml 80μIU/ml 140μIU/ml3. 酶結(jié)合物(HRP-conjugated antibody): 1×6ml/瓶。4. 顯色劑A(Substrate A): 1×7ml/瓶。5. 顯色劑B(Substrate B): 1×7ml/瓶。6. 濃洗滌液(Wash Buffer): 1×15ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。 7. 終止液(Stop Solution): 1×7ml/瓶需要而未提供的試劑和器材1. 標準規(guī)格酶標儀2. 高速離心機3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱4. 干凈的試管和Eppendof管5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,用多通道移液器6. 蒸餾水,容量瓶等標本的采集及保存1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。注:以上標本置4℃保存應小于1周,-20℃或-80℃均應密封保存,-20℃不應超過1個月,-80℃不應超過2個月;標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。操作步驟1. 將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時,取濃縮洗滌液,根據(jù)當批檢測數(shù)量,用蒸餾水上1:20稀釋,混勻后備用。2. 標準品Standard 1- Standard 5,*次使用前先用0.5ml蒸餾水溶解,放置混勻后使用。3. 將酶標板取出,設(shè)一個空白對照孔、不加任何液體;每個標準點依次各設(shè)兩孔,每孔加入相應標準品50ul;其余每個檢測孔直接加待測標本50ul。 4. 每孔加入酶結(jié)合物50ul(空白對照孔除外),充分混勻,貼上不干膠封片,置37℃溫育2小時。5. 手工洗板,棄去孔內(nèi)液體。洗滌液注滿各孔,靜置10秒甩干,重復三次后拍干;洗板機洗板,選擇洗滌三次程序,洗板后拍干。6. 每孔加顯色劑A液50μl,顯色劑B液50μl,振蕩混勻后,37℃避光顯色15分鐘,每孔加終止液50μl。7. 用酶標儀讀數(shù),取波長450nm,先用空白孔調(diào)零點,然后測定各孔OD值。數(shù)據(jù)處理1. 手工作圖:用雙對數(shù)坐標紙,以標準品濃度為橫軸,以對應的0D值為縱軸,畫出平滑曲線或直線,在曲線上按照待測血清OD值找到對應的濃度值。2. 計算機:使用線性擬合功能,應將標準品S1-S5的濃度取對數(shù)(Log(濃度))作為X,將對應的OD值減去空白對照孔OD值后取對數(shù)(Log(OD值-NSB))作為Y,進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。3. 高濃度血清的測值校正:待測血清測值高于160μIU/ml時,應進行校正:設(shè)測出濃度為AμIU/ml,則實際濃度B=Log(A/100)+1×160 。注意事項1. 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫(18-25℃)平衡30分鐘后方可使用,余者應及時封好口,放回2-8℃中避光保存,以備后用。2. 使用前試劑應搖勻。3. 結(jié)果判斷須在反應終止后10分鐘內(nèi)完成。4. 不同批號的試劑不可混用。5. 加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。6. 操作時,試劑盒內(nèi)每種試劑各使用一個吸頭,每一種標準品使用一個吸頭,每一個樣品各使用一個吸頭,吸頭一次性使用。